Цифровая ПЦР для EGFR T790M и C797S: отслеживание последовательной резистентности после терапии TKI

Обзор

Резистентность к терапии, направленной на ЭГФР, приходит в предсказуемом порядке, и этот анализ построен вокруг этой последовательности.В то время как C797S появляется после агента третьего поколения был развернут против T790MНацеливание на обе замены в одной очень чувствительной реакции превращает смутное клиническое впечатление прогрессирования в названный механизм побега.

Как это работает

Цифровая ПЦР разделяет один подготовленный образец на тысячи независимых разделов до начала усиления.Так что после цикла инструмент считает положительные отсеки и применяет статистику Пуассона, чтобы получить абсолютный количество молекул без ссылки на стандартную кривуюСпецифические для аллелей зонды отличают мутационную последовательность от обильного дикого типа.что имеет значение, потому что спасательные клоны часто представляют собой небольшую часть циркулирующего материала в момент прогрессирования становится клинически видимым.

Показания

Анализ подходит для пациентов, которые прогрессируют на лечении, направленном на EGFR, где механизм побега должен быть назван до выбора следующей линии.и ткани могут быть использованы, если можно получить свежий образецОн также поддерживает серийный отбор проб на протяжении всего лечения, поскольку абсолютный подсчет позволяет сравнивать вытяжки, а не один снимок.потому что сброс варьируется, поэтому подтверждение тканей остается целесообразным, когда клиническая картина не согласуется.

Спецификации и отчетность

Подтвердите требуемый объем крови, предел обнаружения, выраженный как фракция мутирующей аллели, и количество копий ДНК, опрошенных на реакцию, поскольку низкий вход тихо ухудшает чувствительность.В отчетах должны быть указаны абсолютные количества мутантов и диких типов наряду с фракцией, обозначить каждую замену отдельно и зафиксировать, не опустился ли ввод ниже проверенного порогового значения.

Хранение и поставки

Работа плазмы регулируется часом. Кровь, забираемая в стандартные EDTA трубки, должна достичь разделения в течение короткого определенного окна, поддерживаемого при 2-8 °C в пути,поскольку разложение лейкоцитов наводняет образец ДНК дикого типа и засыпает сигналСтабилизирующие клетки трубки расширяют это окно и стоят своей премии через распределенные сети сбора.Письменные расписания курьеров и документированные интервалы от притяжения до отделения важны здесь больше, чем для любого теста на основе тканей.

Частые вопросы

Вопрос: Почему выбирать цифровую ПЦР вместо широкой панели секвенирования, когда подозревается устойчивость?Когда вопрос заключается в том, присутствует ли одна известная замена, подсчет разделов достигает более низкого предела обнаружения и возвращается быстрее, чем широкое секвенирование.Вместо этого выбирайте широкую панель, когда путь спасения действительно неизвестен..

Вопрос: Что означает вывод C797S для следующей линии терапии?Это указывает на то, что утечка произошла в месте связывания, на которое нацелены ингибиторы третьего поколения, так что продолжение использования одного и того же агента вряд ли поможет.Результат следует обсуждать в соответствии с текущими рекомендациями по лечению, а не рассматривать как инструкцию по назначению лекарства..

Вопрос: Как быстро плазма должна добраться до лаборатории, чтобы сохранить циркуляцию ДНК?При стандартном сборе ЭДТА интервал от отбора до отделения измеряется часами, а не днями.Подтвердите указанное провайдером окно и подтвердите свой курьер против него, прежде чем обязать места сбора к рабочему процессу.